利用BioLegend TotalSeq™检测表面蛋白挖掘新药靶点

上周序祯达发起了“利用BioLegend TotalSeq™检测表面蛋白挖掘新药靶点”线上直播课，邀请到BioLegend产品应用科学家张易博士以及序祯达研发实验室负责人潘轶做客序祯达直播间。之前错过直播的小伙伴们不用担心，我们将回放视频和演讲内容做了以下整理。

打破单细胞及空间水平的多组学研究壁垒

单细胞测序技术是近年来发展起来的革命性创新的生物技术，在单细胞层面实现了mRNA的解析工作。但是只在基因组学层面做单细胞研究已经不能满足我们科学探索的需求，2017年Peterson,et.al及Stoeckius,et.al通过在抗体上偶联oligo序列，独创性的利用了单细胞测序技术来同时获得其表面蛋白的信息，完美的将基因组学与蛋白组学结合起来。为了更好的让科学研究者了解该项技术，本次课程主要从TotalSeq™的基本工作原理作为切入点，进而带来此技术在抗体开发、细胞治疗、免疫调节中的应用优势及干货案例分享。

通过张易博士和潘轶博士的现场介绍中我们了解到TotalSeq™是一项加强并拓宽单细胞多组学检测的技术，它可以在单细胞这样高精度的水平结合序祯达的10x Genomics、MissionBio、新格元等单细胞平台，获得基因组和转录组信息的同时增加蛋白组信息，并且已在抗体开发、细胞治疗、免疫调节有了实际的应用，切实助力了肿瘤，自身免疫疾病的机理机制研究。

未来随着 TotalSeq™技术的广泛应用，将更快打破单细胞及空间水平的多组学研究壁垒，通过超高参数的表型分析对细胞类型进行深度表征，多组学细胞及空间技术的联合应用可以促进更多生物标志物发现，对复杂系统进行深化理解，为挖掘新的药物靶点开拓了新的研究思路。

问题集锦回顾

小编整理了在线观众的问题及答案，与大家共享。

问1

TotalSeq™抗体在单细胞测序中一次可以使用多少抗体？

答1

目前经过优化的商品化抗体混合物可以达到130-150个抗体每个反应。定制的抗体混合物可达200个。随着抗体数字化的进程，这个上限将不断被推高。目前发表文章有268个抗体检测一个样本。未来可能还会有更多的抗体数量，仍未找到上限。

问2

TotalSeq™抗体使用和质谱流式相比有什么优势？

答2

相比使用TotalSeq™抗体，由于检测平台的限制，目前质谱流式还无法突破130个抗体同时检测的限制。同时，在多组学检测手段的加持下，使用TotalSeq™抗体可以同步获得单细胞转录组和蛋白组的信息，加深单细胞的精准分析。

问3

抗体定制有什么注意事项？

答3

目前可实现现货TotalSeq™抗体以外的定制。包括用户指定抗体，BioLegend提供oligo；或者用户指定oligo序列，BioLegend提供抗体以及偶联。其中注意，指定的抗体请预先进行细胞表面染色，确认染色效果和用量范围，方便后续抗体的使用。同时定制需要一定的评估和生产时间，请合理安排实验的时间。

问4

定制的抗体怎么和universal的kit一起使用呢？

答4

理论上可行的。定制的时请按单细胞建库平台适用抗体系列进行定制，选用的universal cocktail也请用相同系列。由于universal cocktail是经过预先优化和滴定的，请预先确认定制抗体的滴定情况。使用时，将稀释好的定制抗体溶液混合冻干抗体混合物。