洞悉单细胞水平基因修饰制备高质量细胞产品，您准备好了么！

随着越来越多基因与细胞药物上市，众多新型疗法的开发也如火如荼，利用多种基因修饰工具对细胞进行多重改造更加普遍。如在CAR-T中敲除PD-1，从而避免肿瘤对T细胞的抑制作用；或者在异体细胞产品中敲除HLA等分子，降低宿主免疫系统的识别。各类基因修饰使细胞产品的特征更为复杂，为生产工艺优化和质量控制带来了新的挑战。

上周序祯达生物研发总监潘轶博士在直播间带来“细胞治疗产品质量研究与安全性风险评价策略”，下面一起来看看不容错过的精彩内容。

以“质”为先 细胞治疗质量研究的关键技术

大多数细胞治疗产品并非单一的细胞群体，而是具有复杂的构成，不同细胞亚群的占比、功能、安全性风险等特征都会有所差异。很多常规的检测手段并不能精确到细胞水平，对于不同类型的靶标，例如细胞表面蛋白和胞内蛋白的检测也有不同的局限性，很多难题的解决需要引入新的技术方案。

单细胞测序技术作为一种高通量的细胞研究手段，可以在单细胞水平上提供细胞基因组、转录组和蛋白组层面的信息，整合多维度的数据可实现精准化的细胞产品质量研究。

01 单细胞基因组：载体转染阳性率与单细胞载体拷贝数、单细胞在靶与脱靶编辑频率、载体序列突变、靶基因突变

02 单细胞转录组：细胞亚群分析、阳性细胞占比、杂质细胞分析、干细胞分化分析

03 单细胞蛋白组：表面标志物检测、细胞亚群分析

基于单细胞水平 探索细胞亚群载体拷贝数

常规的载体拷贝数检测均为群体水平的平均数值，但在细胞治疗产品中实际包含了多个不同拷贝数的细胞亚群，这些亚群在目的产物表达、细胞功能和安全性风险上都可能存在差别，不同的细胞群体构成可能会影响产品的最终临床效果。利用单细胞测序可以实现细胞中载体拷贝数的精确定量，精准刻画细胞群体构成，为产品工艺优化、质量控制、药理药效分析，已经临床数据分析提供数据基础。

图 平均载体拷贝数接近的样本，细胞群体构成可能存在巨大差异

序祯达生物在基因与细胞治疗领域具有丰富的项目经验，已经建立起服务于药物研发与临床前研究，以及临床试验的全流程检测与分析服务，在CAR-T、CAR-NK、HSC、iPSC来源细胞产品等方面均有丰富项目经验，成功助力客户项目IND与NDA的申报，具备数千例注册临床试验样本检测实力。

问题集锦回顾

以下是在线观众的问题及答案，与大家共享。

问1：单细胞测序对样本有什么要求?

答1：

单细胞转录组测序和基因组测序对于样本的要求基本相同，新鲜或者冻存的单细胞悬液，细胞数量大于1×10^6，细胞活性大于80%。

问2：单细胞测序用于产品检测有没有案例？

答2：

单细胞转录组研究用于细胞产品亚群分析，以及患者回输后的体内细胞追踪等研究已有众多文献报道。在今年12月最新的美国血液学年会上，单细胞技术公司Mission Bio与细胞治疗公司AVROBIO公布了双方的合作成果，在GMP生产场景下利用单细胞测序技术对细胞治疗产品进行质量控制检测，达成产品的高标准检测与快速放行。

问3：细胞基因组稳定性分析一般用什么方案？

答3：

可以结合不同阶段的细胞产品使用不同的技术方案，例如主细胞库、终产品等的检测经常使用全基因组测序，而不同代次的干细胞可以使用高深度外显子组测序等方案。